Hogyan készítsünk következetes tenyésztést: 9 lépés

A kémiában a hígítást az eljárásnak nevezik, amelynek eredményeképpen az anyag koncentrációja oldatban csökken. A szekvenciális hígítás ismétlődő hígításokból áll, amelyek lehetővé teszik, hogy gyorsan csökkentsék a kezdeti koncentrációt. Ezt a módszert olyan kísérletekben alkalmazzuk, amelyekben erősen hígított oldatokra van szükség pontos koncentrációval, amelyet gyakran logaritmikus skála határoz meg, vagy ha szükséges a baktériumok sűrűségének megtalálása. A szekvenciális tenyésztést széles körben használják a kísérleti tudományokban, mint például a biokémia, a mikrobiológia, a farmakológia, a fizika.

Lépések

1. módszer: 2:

Szekvenciális hígítás

egy. Válasszon megfelelő oldószert. A tenyésztés során nagyon fontos kiválasztani a megfelelő oldószert vagy puffert. Sok megoldás desztillált vízzel disszociálható, de ez nem mindig így van. Ha hígítja a baktériumokat vagy más sejteket, szüksége lesz a megfelelő kulturális környezetre. A kiválasztott puffert minden egymást követő hígítással kell használni.

Ha nem biztos benne, hogy jobb, ha pufferként használható, kérdezze meg a tanárt, vagy keresse meg az interneten szükséges információkat: talán valaki már készített ilyen megoldást.

A kép cím szerinti soros hígítások 2. lépés

2. Készítsen több csövet 9 milliliter pufferrel. Ezek a kémcsövek a tenyésztési üresek szerepét fogják játszani. A hígított mintát az első kémcsőbe helyezi, majd egymás után az oldatot a következő vizsgálati csövekbe viszi.

A munka megkezdése előtt hasznos az összes használt kémcsövet jelölni, hogy ne keverje meg a tenyésztési folyamatban lévő megoldásokat.

Mindegyik következő kémcső 10-szer kevesebb koncentrált oldatot tartalmaz, mint az előző. Az első kémcsőben az oldat koncentrációja 1:10 lesz a második - 1: 100-ban, a harmadik - 1: 1000-ben, és így tovább. Határozza meg előre, hogy hány hígítás szükséges, és készítse elő a megfelelő számú csövek.

3. Készítsen egy kémcsövet legalább 2 milliliter hígítatlan megoldással. A következetes hígításhoz ez a módszer legalább 1 millilitát igényel hígítatlan oldatból. Ha csak 1 milliliter van, akkor nem lesz osztatlan megoldás. Írjon erre a tesztcsőre Nr (fejletlen megoldás).

Minden tenyésztés előtt alaposan keverjük össze a megoldást.

A kép cím szerinti soros hígítások 4. lépés

4. Töltsön első tenyésztést. Írjon be 1 millilitot, hígítatlan kémcsövekkel egy pipettában Nr és szakítsa meg a kémcsőjébe egy jelzéssel 1:10, amely 9 milliliter puffert tartalmaz, amely után alaposan összekevered. Ennek eredményeként megoldást kap, amely 9 milliliter pufferrel hígítható. Így a megoldás koncentrációja 10-szer csökken.

Kép cím szerinti soros hígítások 5. lépés

öt. Készítse elő a következő megoldást. A második következetes tenyésztéshez vegyen 1 milliliter oldatot a kémcsőből 1:10 és adjunk hozzá 9 milliliter puffert a kémcsőbe 1: 100. Korábban keverje össze az oldatot a kémcsőben 1:10. Miután hozzáadott egy megoldást egy kémcsőbe 1: 100, Keverje össze a tartalmát alaposan. Ennek eredményeként megoldást tenyészt egy tesztcsőből 1:10, És új megoldás lesz 1: 100 koncentrációval.

6. Szükség esetén folytassa a megoldás tenyésztését. Ezt a folyamatot annyit lehet ismételni, amennyire nem éri el a kívánt koncentrációt. Ha a kísérletnek meg kell határoznia a koncentrációtól való függést, akkor lehetséges, hogy egymás után elkészítsék a megoldásokat 1, 1:10, 1: 100, 1: 1000.

2. módszer 2:

A tenyésztési és végső koncentráció együttható kiszámítása

egy. Meghatároz együttható A végső megoldás hígítása. Ehhez többszörözze az egymást követő tenyésztési együtthatókat. A megfelelő képlet a következő formában van: D_T = D_egy X D₂ X D₃ x ... x d_N, ahol D_T - közös tenyésztési együttható, D_N - N-T hígítási együttható.

Tegyük fel, hogy 4-szerese tenyésztést végeztél 1:10 arányban. Helyettesíti ezt az együtthatót a képletben, és d_T = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000.
Így az utolsó tenyésztés után a negyedik kémcső, a megoldás 1:10.000, azaz a végső megoldás 10-ben lesz.000 kevesebb koncentrált, mint az eredeti (fejletlen).

2. Meghatározza az oldat koncentrációját tenyésztés után. Az oldat koncentrációjának meghatározásához a következetes tenyésztés után meg kell ismerni a kezdeti koncentrációt. Használja a képletet C_Véges = C_ForrásD, ahol C_Véges - az elvált megoldás koncentrációja, C_Forrás - Eredeti koncentráció, D - a tenyésztési együttható felett van meghatározva.

Példa: Ha a kezdeti megoldás koncentrációja 1 volt.000.000 sejtek milliliterenként, és a tenyésztési együttható 1.000, ami megegyezik a végső megoldás koncentrációjával?

A képletet használjuk:

C_Véges = C_ForrásD

C_Véges = 1.000.000/1.000

C_Véges = 1.000 sejtek milliliterenként.

3. Ellenőrizze a dimenziót. A számítások végrehajtásakor győződjön meg róla, hogy megkapta a megfelelő mérési egységeket. Ha a sejtek számától kezdve milliliterenként indult, győződjön meg róla, hogy az eredmény az ezen egységekben is beszerezhető. Ha PPM-ben (ppm) számolva van, az így kapott koncentrációt is promill-ben kell kifejezni.